中药川贝母定量分析方法研究

    余 华1 , 2

    , 姜 艳1

    , 李 萍1 3

    , 李绍平2

    , 王一涛2

    (1. 中国药科大学 现代中药重点实验室 ,江苏 南京 210038 ;

    2. 澳门大学 中华医药研究所 ,澳门)

    [摘要] 目的:研究常用中药川贝母的定量分析方法。方法:应用高效液相色谱法。以 4 种川贝母共有的有

    效成分贝母辛为指标;采用Agilent Hypersil BDS 2C18 (410 mm× 250 mm ,5μm)色谱柱 ,以乙腈2水2二乙胺(37∶ 63∶ 0103)

    为流动相 ,流速110 mL· min- 1;Alltech 2000蒸发光散射检测器检测 ,外标两点法定量。结果:贝母辛在 01031 88～

    11020 mg· mL - 1

    呈线性 ,回收率为10211 %( n = 5) ,RSD 3186 %。根据 33 批不同产地或来源的川贝母药材中贝母辛

    的含量结果 ,确定贝母辛的含量限度为010070 %。结论:本法为良好的贝母辛的定量分析方法 ,可用于川贝母药材

    的质量控制。

    [关键词] 川贝母;贝母辛;HPLC 2ELSD;含量测定;质量控制

    [中图分类号] R 28411 [文献标识码] A [文章编号] 100125302 (2005) 0820572204

    [收稿日期] 2004203220

    [基金项目] 国家自然科学基金(30070886) ;教育部跨世纪人

    才基金( [2002 ]48号)

    [通讯作者] 3

    李萍,Tel : (025) 85391244 ,Fax : (025) 85322747 ,E 2

    mail :lipingli @public1. ptt . js. cn

    川贝母为常用止咳化痰药 , 《中国药典》 2000 年

    版一部川贝母的基源植物包括川贝母 Fritillaria cir2

    rhosa D1 Don1、暗紫贝母 F1 unibracteata Hsiao et K1

    C1 Hsia、梭砂贝母 F1 delavayi Franch1 和甘肃贝母

    F1 przewalskii Maxim1[1 ]。由于川贝母药材来源于多

    基源植物 ,加之成分复杂 ,因而其质量控制一直是一

    个难题 ,药典中仅有形态鉴别方法 ,有效成分或指标

    成分的含量测定方法尚为空白。作者在多年研究贝

    母化学成分和药理作用的基础上[2 ,3 ]

    ,建立川贝母

    定量分析方法 ,为完善川贝母的质量标准提供科学

    依据。

    1 仪器与材料

    Agilent 1100高效液相色谱仪 ,Agilent G1312A二

    元泵 , Rheodyne7725i 手动进样阀 ( 20μ L) , Agilent

    Chemstation6101色谱工作站 ,Agilent 359001 数模转

    换器;Alltech 2000蒸发光散射检测器;WYK- 2 型无

    音无油空压机(天津市蓝珂科技实业公司) 。乙腈为

    色谱纯;纯净水(杭州娃哈哈集团) ;二乙胺、氯仿、氨

    水为分析纯;甲醇为特级纯(江苏汉邦科技有限公

    司) 。贝母辛、西贝素苷、西贝素、贝母甲素和贝母乙

    素对照品由本实验室自制 ,结构经光谱鉴定 ,纯度经

    高效液相色谱分析大于 98 %。川贝母药材样品共

    33份(见表1) ,均经作者本人鉴定 ,并由中国药科大

    学生药学教研室李萍教授复核 ,现存放于中国药科

    大学生药学教研室及澳门大学中华医药研究所。

    2 方法与结果

    211 提取条件的优化

    以甘肃漳县产甘肃贝母为样品 ,对样品提取方

    法进行考察。

    21111 提取溶剂的选择 采用氨水浸润 1 h 后 ,分

    别以乙醚、甲醇、氯仿、氯仿2甲醇(4∶ 1) 4种溶剂冷浸

    过夜 ,超声提取 1 h ,见表 1 ,结果表明 ,乙醚提取杂

    质最少 ,但提取率低;氯仿2甲醇(4∶ 1)提取率最高 ,且杂质少。因此选用氯仿2甲醇(4∶ 1) 作为提取溶

    剂。

    表1 不同溶剂提取率的比较( n = 3) %

    溶剂 贝母辛提取率

    乙醚 01014± 01000 6

    氯仿 01013± 01000 1

    甲醇 01021± 01000 2

    氯仿2甲醇(4∶ 1) 01027± 01000 1

    21112 提取方式的选择 由于氯仿2甲醇(4∶ 1)混

    合溶剂不适宜用索氏提取 ,因此比较了冷浸后超声、热回流2种方式。结果见表2 ,可见氯仿2甲醇(4∶ 1)

    回流提取较完全。

    21113 提取时间的选择 样品以氯仿2甲醇(4∶ 1)

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    第30卷第8期

    2005年4月 中 国 中 药 杂 志

    China Journal of Chinese Materia Medica

    Vol130 ,Issue 8

    April ,2005

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 表2 不同方法提取率的比较( n = 3) %

    提取方法与时间 贝母辛提取率

    超声 1 h 01027± 01000 1

    回流 4 h 01043± 01000 1

    注:超声前先用溶剂冷浸过夜

    分别加热回流(80 ℃) 1 ,2 ,3 ,4 h ,结果见表 3。贝母

    辛2 h即已提取完全 ,由此可确定贝母辛的最佳提

    取条件为:氨水浸润 1 h 后 ,以混合溶剂氯仿2甲醇

    (4∶ 1)加热回流(80 ℃)提取2 h。

    表3 不同提取时间的提取率比较( n = 3)

    提取时间 h 贝母辛提取率 %

    1 01043± 01000 4

    2 01045± 01001 1

    3 01044± 01001 5

    4 01043± 01000 1

    212 色谱条件

    Agilent Hypersil BDS 2C18色谱柱 (410 mm ×250

    mm ,5μm) ;流动相A:梯度洗脱,0～15 min乙腈2水2二

    乙胺(37∶ 63∶ 0103) ,15～20 min线性上升到乙腈2水2二

    乙胺 (50∶ 50∶ 0103) , 20～50 min 乙腈2水2二乙胺

    (50∶ 50∶ 0103) ,50～51 min线性上升到乙腈2水2二乙胺

    (90∶ 10∶ 0103) ,51～55 min 乙腈2水2二乙胺(90∶ 10∶

    0103) ;流动相B :乙腈2水2二乙胺(37∶ 63∶ 0103) ;流速

    110 mL · min - 1; Alltech 2000 蒸发光散射检测器

    (ELSD) ,漂移管温度115 ℃,载气流速310 L· min - 1。

    213 样品制备

    对照品溶液的制备:精密称取贝母辛、西贝素

    苷、西贝素、贝母甲素和贝母乙素对照品各约 5 mg ,置5 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即

    得混合对照品贮备液;精密称取贝母辛对照品约 5

    mg ,置 5 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇

    匀 ,即得贝母辛对照品贮备液。

    供试品溶液的制备:取本品粉末(过 4 号筛) 2

    g ,精密称定 ,置圆底烧瓶中 ,加氨水 4 mL 浸润 1 h ,加混合溶剂氯仿2甲醇(4∶ 1) 40 mL ,称重 ,混匀 ,置 80

    ℃水浴加热回流2 h ,放冷 ,称重 ,加混合溶剂补足重

    量 ,滤过 ,精密量取续滤液 25 mL ,置蒸发皿中蒸干 ,残渣加甲醇溶解并转移至1 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻

    度 ,摇匀 ,即得 ......